反应表现型

法规遵从性

酶综合评价

异构体特异性化学抑制剂和重组酶

反应表型研究评估酶异型特异性抑制剂对在池化的人肝微粒体中孵育的母试验品消失的影响。与重组个体药物代谢酶异构体孵育可证实酶活性。

评估负责代谢测试品的酶可以突出潜在的责任，如由单一酶或多态表达酶催化的代谢途径。

根据药物-药物相互作用(DDI)指南，建议将cypp酶(CYP1A2, CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2D6和CYP3A)的研究作为初步研究，以更好地了解药物的清除途径。如果这些主要的CYP酶不参与药物的代谢，则应评估其他I期和II期酶，包括:

反应表型提供了有关试验品代谢分数的信息，可用于评估患者DDI潜力，为临床研究设计提供信息，预测药代动力学的个体变异性和评估遗传多态性的影响。

方法

测试系统:混合人肝微粒体和重组单独表达的人酶与所需的辅助因子
cypp亚型:CYP1A2, CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6和CYP3A4。(其他cyp, ugt和药物代谢酶也可用)。
用同种异型特异性化学抑制剂和重组酶进行确认。

与磷酸盐缓冲液中的微粒体预孵育至少5分钟。通过添加NADPH或其他适当的辅因子来启动测试物的代谢。通过添加有机溶剂终止孵育，然后使用液相色谱-质谱(LC-MS)对样品进行测试物品和/或其代谢物分析。

在NADPH或其他适当的辅助因子存在下，用微粒体浓度范围(通常为0.1 - 1mg蛋白质/mL)将测试品培养为三重复，共四个时间点，最多60分钟。

对照培养在没有辅助因子的情况下进行。微粒体浓度的孵育条件和产生试样消失线性率的时间点被用来定义后续实验。

在优化条件下，在孵育样品中，以至少八种浓度的测试物品三次重复监测测试物品消失的速度。数据分析采用Michaelis-Menten曲线拟合，动力学参数K_米和V_马克斯都是为试验品确定的。

在不存在或存在酶选择性化学抑制剂的情况下，将试验品以

将试验品与一系列重组人CYPs和UGTs以及其他二甲醚(见上文)在浓度

这些测定将确定负责测试品体外代谢的酶及其程度。测定试样消失和/或代谢物形成的动力学。体外代谢评估确定涉及的主要酶，并提醒您在首次人体试验之前潜在的体内清除机制缺陷。

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