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细胞色素P450 (CYP)和UGT酶的抑制是临床相关药物-药物相互作用的主要原因。
通过在混合的基于人肝脏微粒体的培养中确定其对人CYP酶选择性探针底物代谢的影响，评估测试物的抑制潜力。抑制酶动力学可以进一步表征，所得数据用于预测药物给药后是否可能发生临床显著的DDI。
FDA和ema推荐的研究
细胞毒性和稳定性分析
CYP mRNA和酶诱导
酶抑制研究的调控因素
这些研究是FDA和EMA药物-药物相互作用(DDI)指南推荐的，在进行首次人体试验之前，获得可逆(直接)和不可逆(时间依赖性)细胞色素P450抑制的数据。抑制数据用于确定临床DDI研究的要求和范围。
方法
- 测试系统:混合人肝微粒体(HLM)
- cypp酶评估:CYP1A2, CYP2A6, CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6,CYP2E1和CYP3A4/5
- 根据要求，直接抑制试验评估UGT酶:UGT1A1, UGT1A3, UGT1A4, UGT11A6, UGT1A9, UGT2B7, UGT2B15
- 试验品浓度:8个浓度一式三份
- 所有样品制备和培养都使用Hamilton Microlab Star自动液体处理系统进行
CYP抑制在直接和依赖实验中都有测量。使用cyp选择性底物，底物浓度达到最大反应速度(K米)对每种CYP酶(见下文)。已知抑制剂被用作直接和代谢依赖抑制试验的阳性对照。所有孵育结束时，加入冷却的乙腈，含有稳定标记的特定于CYP底物的内部代谢物标准。
时间依赖性(不可逆)抑制
使用8种浓度的测试品在没有或存在NADPH的情况下孵育30分钟，然后稀释到探针底物测定混合物中。如果观察到显著的时间依赖性抑制，可以确定额外的动力学参数，包括失活常数(k非活性的)和抑制常数(K我)．这些参数是通过改变孵育前时间和抑制剂浓度在实验中确定的，可以帮助确定药物-药物相互作用的可能性。
直接抑制
在8种浓度的试验品不存在或不存在的情况下进行测定，以确定抑制潜力，并在可能的情况下确定IC50。
直接抑制可以通过测定抑制常数(K我)和观察到的抑制类型，使用5种浓度的探针底物。
细胞色素P450 |
底物 |
被分析物 |
直接抑制 |
按时间的抑制 |
|---|---|---|---|---|
CYP1A2 |
非那西汀 |
对乙酰氨基酚 |
氟伏沙明 |
Furafylline |
CYP2B6 |
安非他酮 |
Hydroxybupropion |
Orphenadrine |
三胺硫磷 |
CYP2C8 |
阿莫地喹 |
Desethylamodiaquine |
Montelukast |
二甲苯氧庚酸10 -β葡糖苷酸 |
CYP2C9 |
双氯芬酸 |
4 ' -Hydroxydiclofenac |
Sulfaphenazole |
替尼酸 |
CYP2C19 |
美芬妥因 |
4 ' -Hydroxymephenytoin |
Nootkatone |
拉唑 |
CYP2D6 |
Dextrometorphan |
Dextrorphan |
奎尼丁 |
帕罗西汀 |
CYP3A4/5 |
睾酮 |
6β-Hydroxytestosterone |
酮康唑 |
红霉素 |
CYP3A4/5 |
咪达唑仑 |
1 ' -Hydroxymidazolam |
酮康唑 |
Troleandomycin |
可交付成果
这些分析将提供IC50直接或不可逆抑制CYP酶的值。如果观察到明显的直接抑制，抑制常数(K我)可能是确定的。如果观察到显著的时间依赖性抑制，基于机制的失活参数(K我和k非活性的)可能是确定的。有了这些参数，118bet金博宝在评估临床试验的需要时，可能会提供额外的指导。
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